Plásmido CRISPR de Activación (h) USP18: sc-402259-ACT

El gen humano **USP18** codifica la peptidasa específica de ubiquitina 18, una desISGilasas inducida por interferón que elimina **ISG15** de proteínas sustrato y actúa como un regulador negativo clave de la señalización del interferón de tipo I. Al modular la dinámica de la ISGilación y atenuar la salida de la vía **JAK–STAT** mediante interacciones con **IFNAR2**, USP18 configura programas antivirales, la capacidad de respuesta a citocinas y la homeostasis de la inmunidad innata. La actividad alterada de USP18 se ha relacionado con firmas de interferón desreguladas y fenotipos inflamatorios, y se estudia con frecuencia en contextos como la restricción viral, la evasión inmunitaria y las interacciones tumor–inmunidad. Como resultado, USP18 es un nodo útil para investigar la comunicación cruzada entre la modificación postraduccional, las respuestas transcripcionales al interferón y la proteostasis.

USP18 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de USP18 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

USP18 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus USP18 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional USP18, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de USP18. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo USP18 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de USP18 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía USP18 en células tumorales con expresión de USP18 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.