Plásmido Doble Nickase (m) USP10: sc-423592-NIC

El gen murino Usp10 codifica la peptidasa específica de ubiquitina 10 (USP10), una enzima desubiquitinante que revierte el recambio proteico mediado por ubiquitina para modular la duración de las señales y la proteostasis. USP10 participa en la regulación de redes de respuesta al estrés y programas de destino celular al modular la estabilidad y el tráfico de proteínas clave de señalización, influyendo en procesos como las respuestas al daño del ADN, el recambio relacionado con la autofagia y la señalización inflamatoria. Mediante el control, dependiente de la desubiquitinación, de la abundancia proteica, USP10 puede afectar el control de puntos de control, la susceptibilidad a la apoptosis y la adaptación metabólica. La actividad desregulada de USP10 se ha asociado con fenotipos patológicos en oncología y en contextos relacionados con el sistema inmunitario, lo que convierte a Usp10 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la biología de la vía de la ubiquitina en sistemas de mamíferos.

USP10 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Usp10 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Usp10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Usp10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Usp10 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.