Plásmido CRISPR de Activación (h) USP10: sc-404281-ACT

El USP10 humano codifica una proteasa específica de ubiquitina que elimina cadenas de ubiquitina de proteínas diana para regular su estabilidad, localización y salida de señalización. USP10 participa en el control dependiente de ubiquitina de las respuestas al daño del ADN, la señalización de estrés y el control de calidad de proteínas, incluida la modulación de vías vinculadas a la regulación de p53, la autofagia y el tráfico endosomal. Al dar forma a la proteostasis y a la señalización de los puntos de control, USP10 influye en las respuestas celulares al estrés genotóxico y oxidativo, que con frecuencia se ven alteradas en el cáncer y la neurodegeneración. La actividad alterada de USP10 se ha asociado con una señalización de ubiquitina desregulada y con programas de señalización inflamatoria, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del reajuste de vías.

USP10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de USP10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

USP10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus USP10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional USP10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de USP10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo USP10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de USP10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía USP10 en células tumorales con expresión de USP10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.