Usherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423630

Übersicht

Ush2a kodiert Usherin, ein großes, extrazellulärmatrix-assoziiertes Transmembranprotein, das im periziliären Membrankomplex sensorischer Epithelien angereichert ist und dort die mechanosensorische Struktur sowie die langfristige zelluläre Integrität unterstützt. In der Maus trägt Usherin zur Organisation der Stereozilien und zum Erhalt von Photorezeptoren bei, indem es Proteinkomplexe koordiniert, die an Zelladhäsion, ziliärem Transport und der Kopplung an das Zytoskelett beteiligt sind. Störungen von USH2A sind stark mit dem Usher-Syndrom Typ II und Retinitis pigmentosa assoziiert und verknüpfen dieses Gen mit Signalwegen, die die ziliumabhängige Signalübertragung und die Homöostase sensorischer Neurone steuern. Entsprechend werden Ush2a-Loss-of-Function-Modelle eingesetzt, um ziliären Transport, den Aufbau extrazellulärer Gerüststrukturen und degenerationsbezogene Stressantworten im Kontext von Retina und Innenohr zu untersuchen.

Das Usherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ush2a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ush2a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ush2a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Usherin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ush2a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Usherin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ush2a-Exone abzielen, die für die Usherin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ush2a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Usherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Usherin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ush2a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Usherin HDR-Plasmid (m) und Usherin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ush2a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ush2a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.