urocortin III Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406580

Descripción general

UCN3 codifica urocortina III, un neuropéptido secretado de la familia del factor liberador de corticotropina (CRF) que señaliza de forma preferente a través de CRHR2 para modular programas transcripcionales dependientes de cAMP/PKA. En tejidos neuronales y periféricos, la urocortina III contribuye a la regulación de la fisiología adaptativa al estrés, el balance energético y la actividad autonómica, conectando señales neuroendocrinas con la homeostasis metabólica y cardiovascular. La actividad de la vía de CRHR2 influida por UCN3 se ha estudiado en contextos de fenotipos relacionados con el estrés, el manejo de la glucosa y la función vascular, lo que convierte a UCN3 en un nodo útil para desentrañar la señalización de hormonas peptídicas y la biología de la familia CRF con selectividad por receptores. Se ha asociado una dinámica alterada de la señalización UCN3/CRHR2 con desregulación neuroendocrina y metabólica en modelos experimentales, lo que respalda su relevancia para la investigación mecanicista de enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO urocortin III (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen UCN3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del UCN3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de UCN3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína urocortin III.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en UCN3 para la investigación de la señalización de urocortin III, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de UCN3 críticos para la función de urocortin III
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de UCN3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido urocortin III CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido urocortin III CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus UCN3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR urocortin III (h) y el plásmido HDR urocortin III (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología UCN3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana UCN3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.