urocortin III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406580

Übersicht

UCN3 kodiert Urocortin III, ein sezerniertes Neuropeptid aus der Familie der Corticotropin-Releasing-Faktor(‑CRF)-Peptide, das bevorzugt über CRHR2 signalisiert und dadurch cAMP/PKA-abhängige Transkriptionsprogramme moduliert. In neuralen und peripheren Geweben trägt Urocortin III zur Regulation stressadaptiver Physiologie, der Energiebilanz und autonomer Steuerung bei und verbindet neuroendokrine Signale mit metabolischer und kardiovaskulärer Homöostase. Die durch UCN3 beeinflusste Aktivität des CRHR2-Signalwegs wurde in Zusammenhängen mit stressbezogenen Phänotypen, Glukoseverwertung und Gefäßfunktion untersucht, was UCN3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse der Peptidhormon-Signalübertragung und der rezeptorselektiven CRF-Familienbiologie macht. Veränderte Dynamiken der UCN3/CRHR2-Signalgebung wurden in experimentellen Modellen mit neuroendokriner und metabolischer Dysregulation in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für mechanistische Krankheitsforschung untermauert.

Das urocortin III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UCN3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UCN3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UCN3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die urocortin III-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UCN3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der urocortin III-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UCN3-Exone abzielen, die für die urocortin III-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UCN3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom urocortin III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom urocortin III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UCN3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das urocortin III HDR-Plasmid (h) und urocortin III HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UCN3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UCN3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.