Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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UPIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401796
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- UPIIIa CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してUPIIIaゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: UPIIIa 抗体 (C-6): sc-166808
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
UPIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-401796 | 20 µg | $397.00 |
概要
UPK3Aは、分化した尿路上皮の傘細胞（アンブレラ細胞）の頂端面を強化するウロプラキン斑（プラーク）を構成する、テトラスパニン様の膜貫通型膜タンパク質であるウロプラキンIIIa（UPIIIa）をコードします。UPIIIaは他のウロプラキンと組み立てられて、バリア機能、表面分化、ならびに膀胱の充満・排尿時の機械的耐性を支える特殊な膜ドメインの形成に関与します。上皮の極性や膜タンパク質輸送における役割を通じて、UPK3Aは尿路上皮の恒常性維持および損傷に対する応答に寄与します。ウロプラキンの発現パターンの変化は、膀胱の病理や上皮リモデリングを扱う研究において、尿路上皮の分化状態を示す分子学的特徴としてしばしば解析されます。
UPIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUPK3A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UPK3A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UPK3Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UPIIIaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、UPIIIaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UPK3A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- UPIIIaの機能に不可欠なUPK3Aエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、UPK3Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- UPIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびUPIIIa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UPK3A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
UPIIIa HDRプラスミド（h）および UPIIIa HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUPK3Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUPK3A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。