UPase Lentiviral Activation Particles (h): sc-411050-LAC

Humanes UPP1 kodiert die Uridinphosphorylase (UPase), ein Schlüsselenzym des Pyrimidin-Nukleosidstoffwechsels, das die reversible Phosphorolyse von Uridin und Desoxyuridin katalysiert und dabei Uracil und Ribose-1-phosphat erzeugt. Durch die Regulation des Nukleosid-Salvage-Wegs und der Homöostase der Nukleotidpools beeinflusst UPase die Kapazität der DNA/RNA-Synthese, die zelluläre Proliferation sowie die metabolische Anpassung an die Nährstoffverfügbarkeit. Die UPP1-Aktivität ist in breitere Wege des Pyrimidinabbaus und der Wiederverwertung eingebunden, die in unterschiedlichen Zelltypen den biosynthetischen Fluss und die Redoxbalance unterstützen. Eine dysregulierte Expression von UPP1 wurde in Zusammenhängen mit verändertem Nukleotidstoffwechsel und tumorassoziiertem metabolischem Remodeling beobachtet, was UPP1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Pathway-Rewiring und Stressantworten macht.

UPase Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente UPP1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

UPase Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der UPP1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen UPase-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen UPP1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.