Plasmide CRISPR d'Activation (h) uPAR: sc-400666-ACT

PLAUR code le récepteur humain de l’activateur du plasminogène de type urokinase (uPAR), un récepteur de surface cellulaire ancré par GPI qui localise la protéolyse en se liant à l’uPA et en coordonnant l’activation du plasminogène. Par ses interactions avec les intégrines, la vitronectine et des complexes récepteurs incluant LRP1, uPAR module le remodelage de la matrice extracellulaire, l’adhérence cellulaire, la chimiotaxie et la migration, reliant l’activité protéasique péricellulaire aux voies du cytosquelette et de signalisation telles que MAPK/ERK, PI3K/AKT et la dynamique des adhésions focales. Une expression altérée de PLAUR/uPAR est associée à des phénotypes invasifs et à un remodelage inflammatoire dans de multiples contextes pathologiques, notamment la progression des cancers, la fibrose et les pathologies vasculaires. En tant que régulateur des modifications du microenvironnement induites par les protéases, uPAR est largement étudié dans les mécanismes de métastase, de réparation tissulaire et de trafic des cellules immunitaires.

uPAR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLAUR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

uPAR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLAUR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLAUR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de uPAR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLAUR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de uPAR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie uPAR dans les cellules tumorales présentant une expression de PLAUR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.