ULBP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403663-ACT

ULBP2（UL16結合タンパク質2）は、ストレスによって誘導されるGPIアンカー型のNKG2Dリガンドであり、NK細胞および細胞傷害性Tリンパ球上のNKG2Dと結合することで免疫監視を促進します。ULBP2の発現は、DNA損傷応答、がん遺伝子シグナル、炎症性刺激といった細胞ストレスプログラムによって調節され、細胞表面の免疫原性や細胞傷害性認識を制御する経路とULBP2を結び付けています。ULBP2の発現異常やシェディングは、複数の悪性腫瘍に加え、慢性炎症や感染の文脈でも報告されており、免疫回避や免疫細胞の活性化閾値に影響し得ます。そのためULBP2は、細胞ストレスの機能的指標、腫瘍—免疫相互作用、ならびにNKG2D軸シグナル伝達を規定する機構を読み解くための対象として広く研究されています。

ULBP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ULBP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ULBP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ULBP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はULBP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ULBP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のULBP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるULBP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびULBP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるULBP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。