Plásmido CRISPR de Activación (h) UGTREL1: sc-411438-ACT

SLC35B1 codifica el transportador humano de azúcares nucleotídicos UGTREL1, una proteína transmembrana multipaso que favorece la glicosilación al suministrar azúcares activados a la cara luminal del retículo endoplásmico y/o del aparato de Golgi. Al regular la disponibilidad de sustratos para las glicosiltransferasas, UGTREL1 influye en la glicosilación N‑ligada de proteínas, el control de calidad y el tráfico intracelular, con efectos posteriores sobre la maduración de receptores y la homeostasis de la vía secretora. La alteración del transporte de azúcares nucleotídicos puede remodelar los glicanos de la superficie celular y modificar la señalización, la adhesión y las respuestas al estrés, lo que hace que SLC35B1 sea relevante para estudios de glicoproteostasis y de reconfiguración de rutas en estados celulares asociados a enfermedad. En consecuencia, SLC35B1 se investiga con frecuencia en el contexto del acoplamiento metabólico‑secretor, la función de orgánulos y la regulación dependiente de glicanos de vías inmunes y de factores de crecimiento.

UGTREL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC35B1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UGTREL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC35B1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC35B1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UGTREL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC35B1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UGTREL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UGTREL1 en células tumorales con expresión de SLC35B1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.