UGTREL1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411438-ACT

SLC35B1 codifica il trasportatore umano di zuccheri nucleotidici UGTREL1, una proteina di membrana multipasso che sostiene la glicosilazione fornendo zuccheri attivati al lato luminale del reticolo endoplasmatico e/o dell’apparato di Golgi. Regolando la disponibilità di substrati per le glicosiltransferasi, UGTREL1 influenza la glicosilazione proteica N‑linked, il controllo qualità e il traffico intracellulare, con effetti a valle sulla maturazione dei recettori e sull’omeostasi della via secretoria. L’alterazione del trasporto di zuccheri nucleotidici può rimodellare i glicani di superficie cellulare e modificare segnalazione, adesione e risposte allo stress, rendendo SLC35B1 rilevante per studi sulla glicoproteostasi e sul “rewiring” delle vie di segnalazione in stati cellulari associati a malattia. Di conseguenza, SLC35B1 è spesso studiato nel contesto dell’accoppiamento metabolico‑secretorio, della funzione degli organelli e della regolazione, dipendente dai glicani, di vie immunitarie e di fattori di crescita.

UGTREL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC35B1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

UGTREL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC35B1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC35B1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di UGTREL1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC35B1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da UGTREL1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via UGTREL1 nelle cellule tumorali con espressione di SLC35B1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.