UGT8 Double Nickase Plasmid (h): sc-405110-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das UGT8 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- UGT8 Double-Nickase-Plasmid (h) und UGT8 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf UGT8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UGT8 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405110-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UGT8 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405110-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes UGT8 kodiert die UDP-Galactose:Ceramid-Galactosyltransferase, ein Golgi-assoziiertes Enzym, das die Bildung von Galactosylceramid aus Ceramid und UDP-Galactose katalysiert und damit zentrale Schritte der Glycosphingolipid-Biosynthese einleitet. Diese Aktivität unterstützt die Lipidzusammensetzung des Myelins, die Organisation von Membran-Mikrodomänen sowie Signalprozesse, die mit der Differenzierung von Oligodendrozyten und der neuronalen Homöostase verknüpft sind. Das UGT8-abhängige Lipid-Remodeling steht in Wechselwirkung mit dem Ceramidstoffwechsel und umfassenderen Sphingolipidwegen, die Stressantworten und Zellschicksalsentscheidungen regulieren. Eine veränderte UGT8-Expression oder ein gestörtes Galactosylceramid-Gleichgewicht wurde mit demyelinisierenden und neurodegenerativen Kontexten in Verbindung gebracht und zudem im Rahmen der krebsassoziierten metabolischen Reprogrammierung untersucht, was UGT8 für mechanistische, pathway-orientierte Studien relevant macht.
UGT8 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des UGT8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von UGT8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die UGT8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit UGT8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.