UGT2B7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404209-ACT

UGT2B7 kodiert eine humane UDP-Glucuronosyltransferase, die die Glucuronidierung verschiedener endogener Substrate und Xenobiotika katalysiert und dadurch deren Wasserlöslichkeit erhöht, um die zelluläre Elimination zu fördern. Diese Phase‑II‑Konjugationsaktivität ist in hepatische und extrahepatische Netzwerke des Arzneistoffmetabolismus eingebunden und koordiniert sich in Entgiftungswegen mit transporter-vermittelten Exportprozessen. Unterschiede in der UGT2B7-Expression oder -Aktivität stehen mit interindividuellen Unterschieden in der metabolischen Kapazität in Zusammenhang und beeinflussen die zelluläre Exposition gegenüber bioaktiven lipophilen Verbindungen sowie Reaktionen auf oxidativen Stress. Als zentraler Knotenpunkt der Glucuronid‑Konjugation wird UGT2B7 häufig in der Pharmakogenomik, Toxikologie und in krankheitsorientierten Stoffwechselmodellen untersucht, in denen eine veränderte Konjugation Zellsignalwege und die Homöostase beeinflusst.

UGT2B7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UGT2B7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UGT2B7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UGT2B7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UGT2B7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UGT2B7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UGT2B7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UGT2B7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UGT2B7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UGT2B7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.