Plásmido CRISPR de Activación (h) UGT2B28: sc-404211-ACT

UGT2B28 codifica una UDP‑glucuronosiltransferasa humana que cataliza la glucuronidación de metabolitos endógenos y xenobióticos, aumentando su solubilidad y favoreciendo su eliminación celular. Esta actividad metabólica de fase II contribuye a la desintoxicación y a la homeostasis hormonal al modular la disponibilidad de sustratos derivados de esteroides y otros compuestos lipofílicos. La expresión de UGT2B28 se regula de manera dependiente del tejido y del contexto, lo que la vincula con la adaptación metabólica y las respuestas a la exposición a sustancias químicas. Las alteraciones en la actividad y en los patrones de expresión de UGT2B28 se evalúan con frecuencia en estudios de metabolismo de fármacos, señalización endocrina y estados patológicos en los que se ven perturbadas las vías de manejo de esteroides y desintoxicación.

UGT2B28 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UGT2B28 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UGT2B28 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UGT2B28 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UGT2B28, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UGT2B28. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UGT2B28 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UGT2B28 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UGT2B28 en células tumorales con expresión de UGT2B28 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.