UGT2B10 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404210-ACT

UGT2B10 codiert eine humane UDP-Glucuronosyltransferase, die die Glucuronidierung endogener und xenobiotischer Substrate katalysiert und dadurch deren Löslichkeit für die Ausscheidung über den Phase‑II‑Stoffwechsel erhöht. Dieses ER‑assoziierte Enzym trägt zu hepatischen und extrahepatischen Entgiftungsnetzwerken bei, die mit oxidativen Stressantworten und Arzneistoff‑Verarbeitungswegen verknüpft sind. Unterschiede in der Expression oder Aktivität von UGT2B10 wurden mit interindividuellen Differenzen im Metabolismus ausgewählter Amine und anderer Verbindungen in Zusammenhang gebracht und beeinflussen damit Expositionsprofile und Biomarker‑Auslesewerte. Daher wird UGT2B10 häufig in der Pharmakogenomik, der chemischen Biologie sowie in Modellen der Leberfunktion und metabolischen Homöostase untersucht.

UGT2B10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UGT2B10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UGT2B10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UGT2B10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UGT2B10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UGT2B10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UGT2B10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UGT2B10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UGT2B10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UGT2B10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.