UGT1A5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402838-ACT

UGT1A5 codifica uma UDP-glicuronosiltransferase que catalisa reações de glicuronidação no metabolismo de Fase II, aumentando a solubilidade e favorecendo a eliminação de diversos compostos endógenos e xenobióticos. Como parte do locus UGT1A, a UGT1A5 contribui para redes celulares de desintoxicação que se articulam com o metabolismo hepático e extra-hepático, o equilíbrio redox e as respostas ao estresse químico. A variação na atividade da família UGT1A é amplamente estudada pelo seu impacto no destino de fármacos, na homeostase metabólica e na suscetibilidade à toxicidade decorrente de exposições ambientais. A capacidade de glicuronidação desregulada também é relevante em modelos de disfunção hepática e na biologia do câncer, nos quais a conjugação alterada pode influenciar metabólitos de sinalização e o processamento de xenobióticos.

UGT1A5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UGT1A5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UGT1A5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UGT1A5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UGT1A5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UGT1A5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UGT1A5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UGT1A5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UGT1A5 em células tumorais com expressão de UGT1A5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.