UGT1A5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402838-ACT

UGT1A5 kodiert eine UDP-Glucuronosyltransferase, die in der Phase-II-Metabolisierung Glucuronidierungsreaktionen katalysiert, dadurch die Löslichkeit erhöht und die Ausscheidung verschiedenster endogener und xenobiotischer Verbindungen fördert. Als Teil des UGT1A-Lokus trägt UGT1A5 zu zellulären Entgiftungsnetzwerken bei, die mit dem hepatischen und extrahepatischen Stoffwechsel, dem Redox-Gleichgewicht und chemischen Stressantworten verknüpft sind. Unterschiede in der Aktivität der UGT1A-Familie werden umfangreich untersucht, da sie die Arzneistoffdisposition, die metabolische Homöostase und die Anfälligkeit für Toxizität durch Umweltexpositionen beeinflussen. Eine dysregulierte Glucuronidierungskapazität ist zudem relevant für Modelle der Leberfunktionsstörung sowie für die Krebsbiologie, in der eine veränderte Konjugation Signalmetabolite und den Umgang mit Xenobiotika beeinflussen kann.

UGT1A5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UGT1A5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UGT1A5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UGT1A5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UGT1A5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UGT1A5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UGT1A5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UGT1A5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UGT1A5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UGT1A5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.