UGT1A CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417594-ACT

UGT1A8 kodiert eine humane UDP-Glucuronosyltransferase der UGT1A-Familie, die die Phase‑II‑Glucuronidierung verschiedenster Xenobiotika und endogener Metaboliten katalysiert und dadurch deren Wasserlöslichkeit für die biliäre und renale Ausscheidung erhöht. Diese enzymatische Aktivität verbindet UGT1A8 mit hepatischen und extrahepatischen Entgiftungsnetzwerken, überschneidet sich mit Arzneistoffwechselwegen und zellulären Antworten auf chemischen Stress. Genetische Variation oder veränderte Expression innerhalb der UGT1A-Isoformen kann die Glucuronidierungskapazität verschieben und wurde mit interindividuellen Unterschieden in der Metaboliten-Clearance sowie der Anfälligkeit für eine erhöhte Schadstoffbelastung in Verbindung gebracht. UGT1A8 ist daher relevant für mechanistische Studien zur Konjugationsbiochemie, zur Regulation metabolischer Enzyme und zu kontextabhängigen Effekten auf die zelluläre Homöostase.

UGT1A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UGT1A8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UGT1A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UGT1A8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UGT1A8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UGT1A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UGT1A8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UGT1A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UGT1A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UGT1A8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.