UDP-GlcDH Double Nickase Plasmid (h): sc-405002-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das UDP-GlcDH Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- UDP-GlcDH Double-Nickase-Plasmid (h) und UDP-GlcDH Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf UGDH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: UDP-GlcDH: sc-137058
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UDP-GlcDH Double Nickase Plasmid (h) | sc-405002-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UDP-GlcDH Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405002-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane **UGDH**-Gen kodiert die UDP-Glukose-6-Dehydrogenase (UDP-GlcDH), ein zytosolisches Enzym, das UDP-Glukose zu UDP-Glucuronsäure oxidiert – einem zentralen Vorläufer für die Biosynthese von Glykosaminoglykanen und Proteoglykanen. Durch die Kontrolle der Verfügbarkeit von UDP-Glucuronsäure trägt UDP-GlcDH zur Regulation der Zusammensetzung der extrazellulären Matrix, der Architektur der Glykokalyx sowie der Zell-Zell- und Zell-Matrix-Interaktionen bei, die Adhäsion, Migration und Mechanotransduktion beeinflussen. Die UGDH-Aktivität ist mit dem Kohlenhydratstoffwechsel und den Umwandlungswegen von Nukleotidzuckern verknüpft, welche Glykosylierungsprogramme während der Entwicklung und des Gewebeumbaus unterstützen. Eine fehlregulierte UGDH-Expression oder ein veränderter Fluss durch UDP-Glucuronsäure kann die Bildung von Hyaluronan und sulfatierten GAGs verändern und verbindet diese Achse in experimentellen Systemen mit Fibrose, inflammatorischer Signalgebung und krebsassoziierter Umprogrammierung der Matrix.
UDP-GlcDH Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des UGDH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von UGDH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die UGDH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit UGDH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.