UBE2J1 Double Nickase Plasmid (m): sc-425050-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das UBE2J1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- UBE2J1 Double-Nickase-Plasmid (m) und UBE2J1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Ube2j1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: UBE2J1: sc-377002
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UBE2J1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425050-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Ube2j1** kodiert **UBE2J1**, ein in der ER-Membran verankertes **E2-Ubiquitin-konjugierendes Enzym**, das mit im ER lokalisierten **E3-Ligasen** zusammenarbeitet, um den **ER-assoziierten Abbau (ERAD)** fehlgefalteter oder überschüssiger Proteine zu vermitteln. Indem UBE2J1 Ubiquitin auf Substrate überträgt, die aus dem endoplasmatischen Retikulum retrotransloziert wurden, trägt es zur Aufrechterhaltung der **Proteostase** bei und unterstützt adaptive Signalprozesse während **ER-Stress**, einschließlich des Crosstalks mit Signalwegen der **Unfolded Protein Response (UPR)**. Störungen von ERAD-Komponenten können die Homöostase des sekretorischen Weges, inflammatorische Signalübertragung und die Empfindlichkeit gegenüber proteotoxischem Stress verändern, wodurch UBE2J1 ein relevanter Knotenpunkt für die Untersuchung von Mechanismen ist, die zu Neurodegeneration, metabolischer Dysfunktion und krebsassoziiertem Proteostase-Remodeling beitragen. Seine Aktivität ist zudem für Untersuchungen zur Qualitätskontrolle von Membranproteinen und zur Antigenprozessierung im Zusammenhang mit ubiquitinabhängigem Turnover von Bedeutung.
UBE2J1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Ube2j1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Ube2j1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Ube2j1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Ube2j1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.