UBE2E2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406437

Descripción general

UBE2E2 codifica una enzima E2 conjugadora de ubiquitina que transfiere la ubiquitina activada desde las enzimas E1 a las ligasas E3, favoreciendo la ubiquitinación de sustratos y la proteostasis. A través de su papel en el sistema ubiquitina–proteasoma, UBE2E2 influye en el recambio de proteínas, las respuestas al estrés y la regulación de nodos de señalización que dependen de una ubiquitinación controlada. Una capacidad de ubiquitinación alterada puede afectar a vías que gobiernan la progresión del ciclo celular y las respuestas al daño del ADN, vinculando la disfunción de UBE2E2 con fenotipos relevantes para la señalización oncogénica y la homeostasis celular. Por lo tanto, UBE2E2 se estudia con frecuencia como un modulador de la regulación dependiente de ubiquitina y como un componente de redes más amplias de control de calidad proteica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UBE2E2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen UBE2E2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del UBE2E2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de UBE2E2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UBE2E2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en UBE2E2 para la investigación de la señalización de UBE2E2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de UBE2E2 críticos para la función de UBE2E2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de UBE2E2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UBE2E2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido UBE2E2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus UBE2E2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UBE2E2 (h) y el plásmido HDR UBE2E2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología UBE2E2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana UBE2E2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.