Plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2E1 (m): sc-423577

Présentation

Ube2e1 code UBE2E1, une enzyme E2 de conjugaison de l’ubiquitine qui coopère avec des ligases E3 pour transférer l’ubiquitine sur des protéines substrats, façonnant la protéostasie et le renouvellement des protéines. Par son rôle dans l’ubiquitination, UBE2E1 contribue à la régulation de la progression du cycle cellulaire, des réponses aux dommages de l’ADN et des voies de signalisation adaptatives au stress en modulant la stabilité et l’activité de protéines régulatrices clés. Une perturbation de l’activité des enzymes E2 peut dérégler le contrôle qualité et les réseaux de signalisation dépendants de l’ubiquitine, des processus fréquemment impliqués dans la neurodégénérescence, l’inflammation et la transformation oncogénique. Dans des modèles murins, Ube2e1 constitue un nœud expérimental pertinent pour disséquer la spécificité des voies de l’ubiquitine et la redondance entre membres de la famille E2 dans des contextes tissulaires et liés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2E1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ube2e1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ube2e1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ube2e1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UBE2E1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ube2e1 pour l'étude de la signalisation de UBE2E1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ube2e1 essentiels à la fonction de UBE2E1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ube2e1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UBE2E1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UBE2E1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ube2e1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UBE2E1 plasmide HDR (m) et le UBE2E1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ube2e1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ube2e1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.