UBE1L2 Double Nickase Plasmid (h): sc-412489-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das UBE1L2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- UBE1L2 Double-Nickase-Plasmid (h) und UBE1L2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf UBA6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UBE1L2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-412489-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UBE1L2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-412489-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBA6 kodiert das E1-Ubiquitin-aktivierende Enzym UBE1L2, das die Ubiquitin- und Ubiquitin-ähnliche Konjugation einleitet, indem es Ubiquitin adenlyliert und auf E2-Enzyme überträgt, um die nachgeschaltete, durch E3-Ligasen vermittelte Modifikation von Substraten zu unterstützen. Diese Aktivität trägt zur Koordination einer ubiquitinabhängigen Proteostase, der Proteinkontrolle/-qualitätskontrolle und des regulierten Abbaus von Signalfaktoren bei und beeinflusst damit den Zellzyklus, Stressantworten und die angeborene Immun-Signalübertragung. UBA6 ist außerdem mit dem FAT10/UBD-Signalweg verknüpft, da es Ubiquitin-ähnliche Modifikatoren aktiviert, die die Antigenprozessierung und entzündliche Signalwege mitprägen. Eine Fehlregulation der Ubiquitin-Aktivierung und der Konjugationskaskaden ist breit relevant für Mechanismen, die neurodegenerativen Erkrankungen, krebsassoziiertem Rewiring von Signalwegen und der Biologie entzündlicher Erkrankungen zugrunde liegen, wodurch UBA6 ein nützliches Ziel ist, um Abhängigkeiten innerhalb des Ubiquitin-Systems zu untersuchen.
UBE1L2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des UBA6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von UBA6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die UBA6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit UBA6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.