UBC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418924

Übersicht

Das Mausgen **Ubc** kodiert Polyubiquitin-C (UBC), eine wesentliche Quelle von Ubiquitin-Monomeren, die für den ATP-abhängigen Proteinabbau durch das Ubiquitin-Proteasom-System benötigt werden. UBC unterstützt die ubiquitinierungsgetriebene Regulation des Zellzyklus, der DNA-Schadensantworten, der Stressanpassung und der inflammatorischen Signalübertragung, indem es die Stabilität und Aktivität zentraler Komponenten dieser Signalwege steuert. Da die Ubiquitin-Homöostase proteotoxischen Stress abpuffert und den Signaloutput mitbestimmt, werden eine veränderte Ubiquitinverfügbarkeit und ein Ungleichgewicht der Proteostase häufig in Modellen für Neurodegeneration, krebsrelevante Wachstumskontrolle und Immundysregulation untersucht. **Ubc** wird daher in Maus-Zellen häufig eingesetzt, um die proteasomabhängige Qualitätskontrolle, die Dynamik von Ubiquitinketten sowie das Crosstalk mit Autophagie- und Stressantwortwegen zu analysieren.

Das UBC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ubc-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ubc-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ubc nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UBC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ubc-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UBC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ubc-Exone abzielen, die für die UBC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ubc-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UBC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UBC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ubc-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UBC HDR-Plasmid (m) und UBC HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ubc-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ubc-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.