Plasmide Double Nickase (h) Ub-RPS27A: sc-416542-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Ub-RPS27A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Ub-RPS27A Double Nickase (h) et le plasmide Ub-RPS27A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RPS27A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) Ub-RPS27A | sc-416542-NIC | 20 µg | $410.00 |
RPS27A code une protéine de fusion qui est ensuite maturée après traduction afin de produire l’ubiquitine et la protéine ribosomique S27a de la sous-unité 40S, reliant ainsi la protéostasie dépendante de l’ubiquitine à la biogenèse des ribosomes et à la traduction. L’ubiquitine issue de Ub‑RPS27A contribue au renouvellement des protéines via le système ubiquitine–protéasome, à la régulation de la signalisation des dommages à l’ADN et au remodelage du protéome en réponse au stress. Le composant S27a est incorporé dans la petite sous-unité ribosomique et participe au décodage de l’ARNm ainsi qu’à la capacité traductionnelle globale. La dérégulation des protéines ribosomiques et de l’homéostasie de l’ubiquitine est impliquée dans des altérations du contrôle de la croissance cellulaire, des réponses au stress protéotoxique et des voies de maintien du génome, pertinentes pour la recherche sur le cancer et les maladies neurodégénératives.
Ub-RPS27A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RPS27A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RPS27A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RPS27A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RPS27A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.