Plasmide CRISPR/Cas9 KO U2AF65 (m): sc-423572

Présentation

U2af2 code U2AF65, un composant essentiel du facteur auxiliaire U2 se liant à l’ARN, qui reconnaît le tractus polypyrimidique aux sites d’épissage 3′ et coopère avec U2AF35 pour recruter le snRNP U2 lors des premières étapes de l’assemblage du spliceosome. En couplant la sélection des sites d’épissage à la définition des exons, U2AF65 contribue à façonner des programmes globaux d’épissage alternatif qui régulent la progression du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses au stress. Une perturbation de l’épissage dépendant d’U2AF65 peut modifier l’équilibre des isoformes dans des voies contrôlant les réponses aux dommages de l’ADN et l’apoptose, faisant de U2af2 un nœud utile pour disséquer des phénotypes induits par le traitement de l’ARN. Une reconnaissance dérégulée des sites d’épissage et une activité altérée du complexe U2AF sont largement pertinentes pour les mécanismes à l’origine d’anomalies du développement et du remodelage du transcriptome associé au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO U2AF65 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène U2af2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du U2af2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert U2af2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine U2AF65.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en U2af2 pour l'étude de la signalisation de U2AF65, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de U2af2 essentiels à la fonction de U2AF65
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de U2af2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le U2AF65 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le U2AF65 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus U2af2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le U2AF65 plasmide HDR (m) et le U2AF65 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie U2af2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles U2af2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.