U1 SnRNP 70 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401829-ACT

SNRNP70 kodiert U1 SnRNP 70, eine Kernkomponente des U1‑kleinen nukleären Ribonukleoproteins, das 5′‑Spleißstellen erkennt und während des prä‑mRNA‑Spleißens die Assemblierung des Spleißosoms initiiert. Über seine Interaktionen mit der U1‑snRNA und weiteren spleißosomalen Faktoren unterstützt U1 SnRNP 70 eine präzise Exondefinition, kotranskriptionelle RNA‑Prozessierung und die globale Regulation von Genexpressionsprogrammen. Störungen der Spleißosomfunktion und eine veränderte Auswahl von Spleißstellen sind wiederkehrende Merkmale zellulärer Stressantworten und einer onkogenen transkriptionellen Umprogrammierung, was SNRNP70 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Kontrolle der RNA‑Prozessierung macht. Aberrante Spleißmuster im Zusammenhang mit spleißosomalen Störungen sind auch für Neurodegeneration und andere Erkrankungen relevant, bei denen der RNA‑Metabolismus beeinträchtigt ist, was mechanistische Studien zu U1‑assoziierten Signalwegen motiviert.

U1 SnRNP 70 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SNRNP70-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

U1 SnRNP 70 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SNRNP70-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SNRNP70-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen U1 SnRNP 70-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SNRNP70-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von U1 SnRNP 70-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des U1 SnRNP 70-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SNRNP70-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.