Tyro3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401412-ACT

Das humane Gen **TYRO3** kodiert Tyro3, eine Rezeptor-Tyrosinkinase aus der TAM-Familie, die durch die vitamin-K-abhängigen Liganden **GAS6** und **PROS1** aktiviert wird und im Zusammenspiel mit phosphatidylserinbindenden Kontexten signalisiert. Nach Aktivierung reguliert Tyro3 Zellüberleben, Proliferation und Migration über Signalwege wie **PI3K–AKT**, **MAPK/ERK** und **STAT** und trägt über TAM-vermitteltes negatives Feedback zur **Efferzytose** sowie zur Dämpfung der angeborenen Immunantwort bei. Die TYRO3-Aktivität beeinflusst die zelluläre Homöostase in Immun- und Nervengeweben und wurde in mehreren Tumorkontexten mit veränderter inflammatorischer Signalgebung und onkogenen Phänotypen in Verbindung gebracht. Als Teil des TAM-Netzwerks mit **AXL** und **MERTK** ist Tyro3 außerdem an Rezeptor-Crosstalk beteiligt, der Zytokinantworten, phagozytische Clearance und Gewebe-Remodelling mitprägt.

Tyro3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TYRO3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Tyro3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TYRO3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TYRO3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Tyro3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TYRO3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Tyro3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Tyro3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TYRO3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.