Plasmide Double Nickase (h) Type I 4-phosphatase: sc-404750-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Type I 4-phosphatase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Type I 4-phosphatase Double Nickase (h) et le plasmide Type I 4-phosphatase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant INPP4A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Type I 4-phosphatase Antibody (E-2): sc-390549
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Type I 4-phosphatase | sc-404750-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Type I 4-phosphatase | sc-404750-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INPP4A code la 4‑phosphatase de type I, une phosphatase 4 des polyphosphates d’inositol qui hydrolyse le phosphatidylinositol 3,4‑bisphosphate en phosphatidylinositol 3‑phosphate, remodelant ainsi les réservoirs de phosphoinositides membranaires. Par cette activité, elle module la dynamique de signalisation dépendante de PI3K, en influençant le recrutement des effecteurs à domaine PH, l’identité des membranes endosomales et, en aval, le contrôle des programmes de croissance et de survie cellulaires. La fonction d’INPP4A s’articule avec la signalisation médiée par les récepteurs et les processus de trafic vésiculaire qui coordonnent la détection des nutriments et les réponses au stress. Une régulation altérée d’INPP4A et du renouvellement de PI(3,4)P2 a été associée dans la littérature à des réseaux de signalisation dérégulés pertinents pour la biologie du cancer et la neurobiologie, étayant des études mécanistiques sur le remodelage des voies de signalisation.
Type I 4-phosphatase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus INPP4A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de INPP4A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de INPP4A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de INPP4A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.