Plasmide CRISPR/Cas9 KO TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 (m): sc-423540

Présentation

Ttf1 (TTF1/facteur de terminaison de la transcription 1) est une protéine se liant à l’ADN de manière spécifique à la séquence, qui agit comme facteur de terminaison de la transcription et comme barrière à la progression des fourches de réplication au sein des répétitions d’ADN ribosomal (ADNr). Dans les cellules de souris, TTF1 contribue à l’organisation de la chromatine nucléolaire, coordonne la transcription par l’ARN polymérase I avec le processing de l’ARNr, et soutient la stabilité du génome en régulant les conflits réplication–transcription au niveau de l’ADNr. Par ces fonctions, TTF1 participe à l’homéostasie du nucléole et à la biogenèse des ribosomes, des processus étroitement liés à la prolifération et aux réponses cellulaires au stress. La dérégulation du contrôle de la transcription de l’ADNr et de la fonction nucléolaire est fréquemment impliquée dans des programmes de croissance oncogéniques et dans des phénotypes plus larges d’instabilité génomique, ce qui fait de Ttf1 une cible pertinente pour les études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ttf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ttf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ttf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TTF/Transcription Termination Factor/TTF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ttf1 pour l'étude de la signalisation de TTF/Transcription Termination Factor/TTF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ttf1 essentiels à la fonction de TTF/Transcription Termination Factor/TTF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ttf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ttf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 plasmide HDR (m) et le TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ttf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ttf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.