TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407927

Übersicht

TTF1 (Transcription Termination Factor 1; auch als TTFC bekannt) ist ein nukleoläres, DNA-bindendes Protein, das die Termination der Transkription durch RNA-Polymerase I reguliert und zur Organisation des rDNA-Chromatins sowie zur Architektur des Nukleolus beiträgt. Durch die Bindung an spezifische Terminatorelemente innerhalb ribosomaler DNA‑Repeats hilft TTF1, die rRNA‑Synthese mit Replikations- und Reparaturvorgängen am rDNA‑Lokus zu koordinieren, und beeinflusst dadurch die Ribosomenbiogenese und die Proteostase. Eine veränderte Kontrolle der Pol‑I‑Transkription und der Nukleolusfunktion ist ein Kennzeichen proliferativen Stresses und wird häufig im Kontext onkogener Signalwege, genomischer Instabilität und zellulärer Seneszenz untersucht. Daher wird TTF1 häufig in Signalwegen analysiert, die die nukleoläre Homöostase, die Transkriptionsregulation und Zellzyklus‑Checkpoint‑Antworten miteinander verknüpfen.

Das TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TTF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TTF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TTF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TTF/Transcription Termination Factor/TTF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TTF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TTF/Transcription Termination Factor/TTF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TTF1-Exone abzielen, die für die TTF/Transcription Termination Factor/TTF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TTF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TTF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 HDR-Plasmid (h) und TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TTF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TTF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.