TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423405

Übersicht

Nkx2-1 kodiert TTF-1 (Thyroid Transcription Factor 1), einen homeodomänenhaltigen Transkriptionsfaktor, der die Linienfestlegung und Differenzierungsprogramme in der Schilddrüse, im Lungenepithel und in Regionen des ventralen Vorderhirns koordiniert. NKX2-1 reguliert Gennetzwerke, die an epithelialer Identität, Morphogenese und sekretorischer Funktion beteiligt sind, einschließlich Signalwege, die die Surfactant-Produktion und die Biosynthese von Schilddrüsenhormonen steuern. Durch Bindung an Enhancer und kooperative Interaktionen mit anderen Entwicklungsregulatoren trägt es dazu bei, gewebespezifische transkriptionelle Zustände und die Chromatinzugänglichkeit aufrechtzuerhalten. Eine fehlregulierte NKX2-1-Aktivität oder -Expression ist mit Entwicklungsstörungen verbunden und wird häufig im Kontext der Biologie von Schilddrüsen- und Lungenerkrankungen sowie der linienassoziierten Tumorentstehung und von Zellschicksalsübergängen untersucht.

Das TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nkx2-1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nkx2-1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nkx2-1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nkx2-1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nkx2-1-Exone abzielen, die für die TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nkx2-1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nkx2-1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 HDR-Plasmid (m) und TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nkx2-1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nkx2-1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.