TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400458

Übersicht

NKX2-1 (TTF-1, Thyroid Transcription Factor 1) kodiert einen Homeobox-DNA-bindenden Transkriptionsfaktor, der in der sich entwickelnden und adulten Schilddrüse, im Lungenepithel sowie im ventralen Vorderhirn Zelllinienprogramme etabliert und aufrechterhält. Er reguliert Gen-Netzwerke, die die epitheliale Differenzierung, die Surfactant-Homöostase und die Organmorphogenese steuern, und koordiniert Transkriptionszustände, die mit entwicklungsbiologischen Signalwegen wie Wnt, BMP und FGF verknüpft sind. In der Humanpathologie werden eine veränderte NKX2-1-Dosierung oder Mutationen mit kongenitalen Gehirn–Lunge–Schilddrüse-Phänotypen in Verbindung gebracht und tragen zu kontextabhängiger transkriptioneller Umprogrammierung bei Lungen- und Schilddrüsenerkrankungen bei. Da NKX2-1 als Masterregulator der Zellidentität fungiert, wird es häufig in Differenzierungsmodellen, bei epithelialen Zustandsübergängen und zur Untersuchung onkogener Mechanismen der Linienabhängigkeit untersucht.

Das TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NKX2-1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NKX2-1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NKX2-1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NKX2-1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NKX2-1-Exone abzielen, die für die TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NKX2-1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NKX2-1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 HDR-Plasmid (h) und TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NKX2-1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NKX2-1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.