TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400458-ACT

NKX2-1 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor TTF-1 (auch bekannt als Thyroid Transcription Factor 1), einen lineage-bestimmenden Regulator endodermabgeleiteter Organe, der Transkriptionsprogramme koordiniert, die für die Entwicklung und Differenzierung von Schilddrüse, Lunge und Vorderhirn erforderlich sind. In der Schilddrüse steuert NKX2-1 die Expression von Genen, die an der Hormonsynthese und der epithelialen Polarität beteiligt sind, während es im Lungenepithel die Surfactant-Homöostase und die alveoläre Reifung reguliert. NKX2-1 ist in andere Entwicklungswege integriert, darunter WNT-, BMP- und FGF-Signalgebung, um gewebespezifische Genexpressionszustände zu etablieren und aufrechtzuerhalten. Eine fehlregulierte NKX2-1-Aktivität wird mit kongenitalen Schilddrüsen- und Atemwegsphänotypen in Verbindung gebracht und dient häufig als molekularer Marker und funktioneller Knotenpunkt in Studien zur Biologie von Schilddrüsen- und Lungenerkrankungen, einschließlich Lineage-Plastizität und onkogener transkriptioneller Netzwerke.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NKX2-1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NKX2-1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NKX2-1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NKX2-1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NKX2-1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.