TTC7A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412780

Übersicht

TTC7A kodiert ein Tetratricopeptid-Repeat-haltiges Protein, das an der Organisation multiproteinärer Komplexe beteiligt ist, welche die epitheliale Polarität und die Homöostase des Zytoskeletts unterstützen. Studien bringen TTC7A mit phosphoinositidbezogener Signalgebung sowie mit Membrantransportprozessen in Verbindung, die Zelladhäsion, Aktindynamik und die Integrität des intestinalen Epithels beeinflussen. Loss-of-function-Varianten wurden mit schweren, früh einsetzenden intestinalen und immunologischen Phänotypen assoziiert, wodurch TTC7A einen nützlichen Ausgangspunkt zur Aufklärung von Mechanismen der epithelialen Barrierefunktionsstörung und der Immunfehlregulation darstellt. In humanen Zellmodellen kann die Störung von TTC7A dazu dienen, das Zusammenspiel zwischen Membranorganisation, Stressantworten und linienspezifischen Differenzierungsprogrammen zu untersuchen.

Das TTC7A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TTC7A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TTC7A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TTC7A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TTC7A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TTC7A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TTC7A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TTC7A-Exone abzielen, die für die TTC7A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TTC7A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TTC7A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TTC7A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TTC7A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TTC7A HDR-Plasmid (h) und TTC7A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TTC7A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TTC7A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.