TTC36 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-431423-ACT

Das Mausgen **Ttc36** kodiert **TTC36**, ein tetratricopeptid-(TPR)-haltiges Protein, dem eine Funktion als Gerüstprotein für Multiproteinkomplexe zugeschrieben wird, die Protein-Protein-Interaktionen koordinieren. TPR-Domänenproteine beeinflussen häufig die Proteostase, den intrazellulären Transport und Signalwege, indem sie die Einbindung von Chaperonen sowie die Assemblierung regulatorischer Komplexe modulieren. Obwohl **TTC36** bislang nur unvollständig charakterisiert ist, können expressions- und genetikorientierte Studien seinen Beitrag zu Programmen der Zellzustandskontrolle wie Stressantwort, Differenzierung und Gewebehomöostase aufklären. Eine Fehlregulation der TPR-vermittelten Komplexbildung ist häufig an krankheitsassoziierten Phänotypen beteiligt, was **Ttc36** zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Untersuchungen in Mausmodellen macht.

TTC36 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ttc36-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TTC36 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ttc36-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ttc36-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TTC36-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ttc36-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TTC36-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TTC36-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ttc36-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.