TTC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426212

Übersicht

Das murine Ttc1-Gen kodiert das Tetratricopeptid-Repeat-Domänenprotein 1 (TTC1), ein TPR-haltiges Scaffold-Protein, das an Protein-Protein-Interaktionen beteiligt ist, welche die Faltung und den Transport von Multiproteinkomplexen koordinieren. TTC1 wird mit chaperonverknüpften Prozessen und der Regulation von Signalknoten in Verbindung gebracht, die den zellulären Umgang mit Stress, die Proteostase sowie die Organisation des Zytoskeletts oder von Organellen beeinflussen. Über diese Funktionen kann TTC1 den Verlauf des Zellzyklus und Differenzierungsprogramme modulieren, indem es die Stabilität und Assemblierung zentraler regulatorischer Faktoren prägt. Eine Dysregulation von Proteostase und Signalhomöostase ist in der neuroentwicklungs- und neurodegenerationsbezogenen Forschung ebenso wie in der Tumorbiologie breit relevant, wodurch Ttc1 ein nützlicher Locus für mechanistische Studien ist.

Das TTC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ttc1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ttc1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ttc1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TTC1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ttc1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TTC1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ttc1-Exone abzielen, die für die TTC1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ttc1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TTC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TTC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ttc1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TTC1 HDR-Plasmid (m) und TTC1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ttc1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ttc1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.