TSSK 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423532

Übersicht

Das murine Tssk2 kodiert die testisspezifische Serin/Threonin-Proteinkinase 2 (TSSK2), eine in Keimzellen angereicherte Kinase, die mit der postmeiotischen Differenzierung von Spermatiden und den für die Spermienreifung erforderlichen molekularen Umbauprozessen in Verbindung gebracht wird. Kinasen der TSSK-Familie sind mit der phosphorylierungsabhängigen Steuerung von Spermiogenese-Programmen assoziiert, darunter Chromatin-Reorganisation, Zytoskelettdynamik und der Aufbau flagellärer Strukturen. Eine Störung der TSSK-Signalübertragung wurde in experimentellen Modellen mit Defekten der männlichen Fertilität und einer abnormalen Spermienfunktion verknüpft, was TSSK2 zu einem nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung der Reproduktionsbiologie macht. Als auf den Hoden beschränkte Kinase dient TSSK2 außerdem als Modell, um gewebespezifische Kinase-Netzwerke und Proteostase während später Stadien der Keimzellentwicklung zu analysieren.

Das TSSK 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tssk2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tssk2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tssk2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TSSK 2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tssk2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TSSK 2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tssk2-Exone abzielen, die für die TSSK 2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tssk2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TSSK 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TSSK 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tssk2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TSSK 2 HDR-Plasmid (m) und TSSK 2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tssk2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tssk2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.