Plasmide CRISPR/Cas9 KO TSSK 2 (m): sc-423532

Présentation

Le gène murin **Tssk2** code la **kinase sérine/thréonine 2 spécifique du testicule** (TSSK2), une kinase enrichie dans les cellules germinales, impliquée dans la différenciation post-méiotique des spermatides et dans les événements de remodelage moléculaire nécessaires à la maturation des spermatozoïdes. Les kinases de la famille TSSK sont associées à un contrôle de la spermiogenèse dépendant de la phosphorylation, notamment la réorganisation de la chromatine, la dynamique du cytosquelette et l’assemblage des structures flagellaires. La perturbation de la signalisation TSSK a été liée à des défauts de fertilité mâle et à une fonction spermatiques anormale dans des modèles expérimentaux, faisant de TSSK2 un nœud utile pour l’étude de la biologie de la reproduction. En tant que kinase restreinte au testicule, TSSK2 sert également de modèle pour disséquer les réseaux de kinases spécifiques de tissu et la protéostasie au cours des stades tardifs du développement des cellules germinales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TSSK 2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tssk2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tssk2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tssk2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TSSK 2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tssk2 pour l'étude de la signalisation de TSSK 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tssk2 essentiels à la fonction de TSSK 2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tssk2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TSSK 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TSSK 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tssk2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TSSK 2 plasmide HDR (m) et le TSSK 2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tssk2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tssk2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.