TSPAN7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423425

Descripción general

Tspan7 codifica la proteína tetraspanina TSPAN7, un andamiaje de membrana de múltiples pasos que organiza microdominios enriquecidos en tetraspaninas y modula la distribución y la señalización de receptores asociados en la superficie celular. En el ratón, TSPAN7 está implicada en el tráfico de membrana, la remodelación del citoesqueleto y procesos de comunicación célula–célula que influyen en el desarrollo neuronal y la organización sináptica, y también puede afectar programas de adhesión y motilidad en otros tipos celulares. Mediante interacciones que determinan el agrupamiento de receptores y la señalización downstream, TSPAN7 contribuye a vías relacionadas con la endocitosis, la dinámica de actina y la transducción de señales en compartimentos especializados de la membrana. La desregulación de la función de las redes de tetraspaninas se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y conectividad celular alterada, lo que convierte a Tspan7 en un locus útil para estudios mecanísticos de la biología de los microdominios de membrana.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TSPAN7 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tspan7 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tspan7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tspan7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TSPAN7.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tspan7 para la investigación de la señalización de TSPAN7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tspan7 críticos para la función de TSPAN7
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tspan7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TSPAN7 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TSPAN7 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tspan7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TSPAN7 (m) y el plásmido HDR TSPAN7 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tspan7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tspan7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.