Plásmido CRISPR de Activación (h) TSHR: sc-400848-ACT

El receptor de la hormona estimulante de la tiroides (TSHR) es un GPCR de clase A glicosilado, expresado principalmente en las células foliculares tiroideas, donde transduce las señales de la TSH hipofisaria para regular la biosíntesis de hormonas tiroideas y el crecimiento de la glándula. Tras la unión del ligando, el TSHR activa la señalización de cAMP/PKA mediada por Gαs y también puede activar las vías de Gαq/PLC y MAPK, coordinando programas transcripcionales que controlan la captación de yoduro, el procesamiento de la tiroglobulina y la diferenciación específica de la tiroides. La señalización o expresión desregulada del TSHR se asocia con enfermedad tiroidea autoinmunitaria, incluida la enfermedad de Graves, y con alteraciones de la homeostasis tiroidea que pueden contribuir a nódulos hiperfuncionantes y a la transformación neoplásica. Como receptor de superficie que integra señales endocrinas y relacionadas con el sistema inmunitario, el TSHR es un modelo clave para estudiar el tráfico de GPCR, la desensibilización del receptor y las redes reguladoras del linaje tiroideo.

TSHR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TSHR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TSHR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TSHR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TSHR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TSHR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TSHR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TSHR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TSHR en células tumorales con expresión de TSHR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.