TSHβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423526

Panoramica

Tshb codifica la subunità beta dell’ormone tireostimolante (TSHβ), un componente di un ormone glicoproteico ipofisario che conferisce specificità recettoriale alla segnalazione del TSH nella ghiandola tiroidea. Nei tireotrofi, l’espressione di Tshb è controllata dall’ormone di rilascio della tireotropina (TRH) ipotalamico e dal feedback negativo degli ormoni tiroidei, integrando l’omeostasi endocrina con i programmi trascrizionali che governano la differenziazione ipofisaria e la produzione ormonale. L’attivazione del recettore del TSH indotta da TSHβ promuove la biosintesi degli ormoni tiroidei e la regolazione metabolica sistemica, collegando questo asse a processi quali crescita, bilancio energetico e termogenesi. La disregolazione di Tshb e del feedback ipotalamo–ipofisi–tiroide a monte è rilevante nei modelli sperimentali di disfunzione centrale dell’asse tiroideo e nei fenotipi endocrini che influenzano sviluppo e metabolismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TSHβ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tshb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tshb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tshb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TSHβ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tshb per lo studio della segnalazione di TSHβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tshb critici per la funzione di TSHβ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tshb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TSHβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TSHβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tshb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TSHβ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TSHβ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tshb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tshb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.