TSHβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423526

Übersicht

Tshb kodiert die Beta-Untereinheit des thyreoideastimulierenden Hormons (TSHβ), eine Untereinheit eines hypophysären Glykoproteinhormons, die die Rezeptorspezifität für die TSH-Signalübertragung in der Schilddrüse vermittelt. In Thyreotrophen wird die Tshb-Expression durch das hypothalamische Thyreotropin-Releasing-Hormon sowie durch eine negative Rückkopplung der Schilddrüsenhormone reguliert und verbindet so die endokrine Homöostase mit Transkriptionsprogrammen, die die Differenzierung der Hypophyse und die Hormonausschüttung steuern. Die durch TSHβ vermittelte Aktivierung des TSH-Rezeptors fördert die Biosynthese von Schilddrüsenhormonen und die systemische Stoffwechselregulation und verknüpft diese Achse mit Prozessen wie Wachstum, Energiebilanz und Thermogenese. Eine Fehlregulation von Tshb und der übergeordneten hypothalamisch–hypophysär–thyreoidalen Rückkopplung ist relevant für experimentelle Modelle einer zentralen Dysfunktion der Schilddrüsenachse sowie für endokrine Phänotypen, die Entwicklung und Stoffwechsel beeinflussen.

Das TSHβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tshb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tshb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tshb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TSHβ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tshb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TSHβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tshb-Exone abzielen, die für die TSHβ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tshb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TSHβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TSHβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tshb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TSHβ HDR-Plasmid (m) und TSHβ HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tshb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tshb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.