TSG-6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400765-ACT

TNFAIP6 kodiert das durch Tumornekrosefaktor induzierbare Protein 6 (TSG-6), ein sezerniertes, Hyaluronan-bindendes Protein, das durch inflammatorische Stimuli wie TNF und IL‑1 rasch induziert wird. TSG-6 moduliert den Umbau der extrazellulären Matrix, indem es den Transfer von Heavy Chains vom Inter‑α‑Inhibitor auf Hyaluronan katalysiert und dadurch die perizelluläre Matrixorganisation, die Leukozytenadhäsion und die Gewebshydratation verändert. Über diese Aktivitäten greift TSG-6 in zytokingetriebene Signalprogramme ein, darunter NF‑κB‑assoziierte Entzündungsreaktionen und Prozesse der Wundreparatur. Eine dysregulierte TNFAIP6/TSG‑6-Expression wurde bei entzündlichen und fibrotischen Erkrankungen sowie im tumorassoziierten Stroma beschrieben, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt zur Untersuchung der Regulation durch das Mikromilieu unterstreicht.

TSG-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TNFAIP6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TSG-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TNFAIP6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TNFAIP6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TSG-6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TNFAIP6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TSG-6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TSG-6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TNFAIP6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.