Particules Lentivirales d'Activation (h) tsg 101: sc-400290-LAC

TSG101 (tumor susceptibility gene 101) code tsg101, un composant central d’ESCRT-I qui reconnaît les cargos ubiquitinylés et coordonne le tri endosomal, la biogenèse des corps multivésiculaires et la dégradation lysosomale. Grâce au remodelage membranaire dépendant d’ESCRT, TSG101 participe aussi à l’abscission cytokinétique et contribue à la réparation de la membrane plasmique ainsi qu’au trafic lié à l’autophagie. Ces activités recoupent les voies de diminution des récepteurs, d’arrêt de la signalisation et de protéostasie, qui influencent la croissance cellulaire et les réponses au stress. Une expression dérégulée de TSG101 ou un dysfonctionnement d’ESCRT est fréquemment étudié en biologie du cancer et dans les interactions hôte–pathogène, où le bourgeonnement membranaire et le trafic vésiculaire sont perturbés.

Les particules d'activation lentivirales tsg 101 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TSG101 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales tsg 101 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TSG101, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de tsg 101. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TSG101 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.