Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRRAP: sc-402748-ACT

TRRAP (protéine associée aux domaines de transformation/transcription) est une grande protéine adaptatrice qui agit comme cofacteur essentiel de multiples complexes d’histone acétyltransférases, notamment SAGA et TIP60, en reliant des facteurs de transcription spécifiques de séquence au remodelage de la chromatine. En coordonnant une régulation de l’expression génique dépendante de l’acétylation, TRRAP influence la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les programmes de différenciation. Elle participe à des voies contrôlées par les réseaux transcriptionnels de MYC et d’E2F et soutient l’intégrité du génome via un contrôle, médié par la chromatine, de la réparation et du stress associé à la réplication. Une activité dérégulée de TRRAP et une altération de l’assemblage des complexes ont été associées à des états transcriptionnels oncogéniques et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation épigénétique.

TRRAP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRRAP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRRAP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRRAP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRRAP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRRAP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRRAP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRRAP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRRAP dans les cellules tumorales présentant une expression de TRRAP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.