Plasmide Double Nickase (h) TRPM4: sc-402176-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TRPM4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TRPM4 Double Nickase (h) et le plasmide TRPM4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TRPM4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TRPM4 | sc-402176-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TRPM4 | sc-402176-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRPM4 code un canal cationique monovalent activé par le Ca2+ qui conduit les ions Na+ et K+ afin de dépolariser la membrane plasmique, sans transporter directement le Ca2+. En modulant le potentiel de membrane, TRPM4 régule l’entrée de Ca2+ via d’autres canaux et influence la signalisation en aval liée à l’excitabilité, à la sécrétion, à la régulation du volume cellulaire et à l’activation des cellules immunitaires. L’activité de TRPM4 s’articule avec des voies dépendantes du calcium, notamment la signalisation induite par PLC/IP3 et la régulation de programmes transcriptionnels dépendants de NFAT. Un dysfonctionnement de TRPM4 a été impliqué dans des troubles de la conduction et du rythme cardiaques, des processus neuro-inflammatoires et des phénotypes associés au cancer tels qu’une migration et une prolifération altérées, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de la signalisation des canaux ioniques.
TRPM4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRPM4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRPM4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRPM4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRPM4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.