Plásmido CRISPR de Activación (h) TRPM4: sc-402176-ACT

TRPM4 codifica un canal catiónico monovalente activado por Ca2+ que conduce Na+ y K+ para despolarizar la membrana plasmática sin transportar directamente Ca2+. Al moldear el potencial de membrana, TRPM4 modula la entrada de Ca2+ a través de canales operados por depósitos (store-operated) e influye en la señalización posterior dependiente de Ca2+, incluida NFAT y otros programas transcripcionales que controlan la excitabilidad, la secreción y la motilidad celular. La actividad de TRPM4 se ha vinculado a la regulación de la conducción cardíaca y del tono vascular, y contribuye a la activación de células inmunitarias y a la señalización inflamatoria en poblaciones mieloides y linfoides. La expresión desregulada de TRPM4 o la función alterada del canal se asocian con mecanismos arritmogénicos, respuestas neuroinflamatorias y fenotipos proliferativos modificados relevantes para estudios de oncología y remodelado tisular.

TRPM4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRPM4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRPM4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRPM4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRPM4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRPM4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRPM4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRPM4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRPM4 en células tumorales con expresión de TRPM4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.