TRPC5 Plasmide Double Nickase (h): sc-403745-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRPC5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRPC5 Double Nickase Plasmid (h) e il TRPC5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TRPC5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRPC5 Antibody (1C8): sc-293259
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRPC5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403745-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRPC5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403745-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRPC5 (transient receptor potential cation channel subfamily C member 5) codifica un canale cationico non selettivo, permeabile al Ca2+, che funge da sensore di segnali extracellulari e intracellulari per regolare l’eccitabilità di membrana e la segnalazione dipendente dal calcio. Nelle cellule umane, TRPC5 contribuisce all’ingresso di calcio operato da recettore a valle delle vie dei GPCR e delle tirosin-chinasi recettoriali, intersecandosi con la segnalazione PLC, il metabolismo dei fosfoinositidi e programmi trascrizionali a valle quali NFAT e MAPK. L’attività di TRPC5 influenza la dinamica del citoscheletro, la migrazione cellulare e la funzione di barriera tramite effettori dipendenti dal Ca2+, collegando l’apertura del canale a risposte meccanochimiche. Una segnalazione di TRPC5 deregolata è stata associata a contesti rilevanti per la neurobiologia, la fisiologia renale e cardiovascolare e le risposte allo stress cellulare, rendendolo un bersaglio utile per la dissezione delle vie di segnalazione in modelli pertinenti alla malattia.
TRPC5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRPC5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRPC5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRPC5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRPC5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.