Plasmide Double Nickase (h) TRPC5: sc-403745-NIC

TRPC5 (transient receptor potential cation channel subfamily C member 5) code un canal cationique non sélectif perméable au Ca2+, qui fonctionne comme un capteur de signaux extracellulaires et intracellulaires afin de réguler l’excitabilité membranaire et la signalisation dépendante du calcium. Dans les cellules humaines, TRPC5 contribue à l’entrée de calcium activée par les récepteurs en aval des voies des GPCR et des récepteurs à activité tyrosine kinase, en s’articulant avec la signalisation PLC, le métabolisme des phosphoinositides et des programmes transcriptionnels en aval tels que NFAT et MAPK. L’activité de TRPC5 influence la dynamique du cytosquelette, la migration cellulaire et la fonction de barrière via des effecteurs dépendants du Ca2+, reliant l’ouverture du canal à des réponses mécanochimiques. Une signalisation TRPC5 dérégulée a été associée à des contextes pertinents pour la neurobiologie, la physiologie rénale et cardiovasculaire, ainsi que les réponses au stress cellulaire, ce qui en fait une cible utile pour l’analyse des voies dans des modèles pertinents pour les maladies.

TRPC5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRPC5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRPC5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRPC5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRPC5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.