TRPC3/6/7 Double Nickase Plasmid (h): sc-403740-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TRPC3/6/7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TRPC3/6/7 Double-Nickase-Plasmid (h) und TRPC3/6/7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TRPC3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TRPC6: sc-515837
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRPC3/6/7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403740-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRPC3/6/7 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403740-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRPC3 kodiert einen durch Diacylglycerol aktivierten, nichtselektiven Kationenkanal der TRPC-Unterfamilie, der zum rezeptorvermittelten Ca2+-Einstrom und zur Membrandepolarisation beiträgt. TRPC3 bildet funktionelle Komplexe mit den verwandten Untereinheiten TRPC6 und TRPC7 und koppelt damit GPCR- sowie Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalwege an calciumabhängige Transkriptionsprogramme, Zytoskelett-Remodelling und kontraktile Antworten. Die Kanalaktivität wird häufig nachgeschaltet von PLCβ/PLCγ-Signalwegen rekrutiert und durch Lipidsignale, Kinasekaskaden und den zellulären Redoxzustand moduliert. Eine fehlregulierte TRPC3/6/7-Signalgebung wurde mit pathologischem Remodelling und erhöhter Erregbarkeit in mehreren Geweben in Verbindung gebracht, darunter im kardiovaskulären System, in der Niere und im Nervensystem, was TRPC3/6/7 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung calciumgetriebener Stress- und Differenzierungswege macht.
TRPC3/6/7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TRPC3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TRPC3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TRPC3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TRPC3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.