TRPC3/6/7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403740

Übersicht

TRPC3 ist ein Ca2+-durchlässiger, nichtselektiver Kationenkanal der TRPC3/6/7-Unterfamilie, der die rezeptoraktivierte Phospholipase‑C-Signalübertragung mit Membrandepolarisation und intrazellulärem Calciumeinstrom koppelt. Die Kanalaktivität wird durch Diacylglycerol reguliert und integriert Signale nachgeschaltet von GPCR- und Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalwegen; dadurch prägt TRPC3 Ca2+-abhängige Transkription, Zytoskelett-Umbau, Sekretion und Kontraktilität. TRPC3-haltige Kanalkomplexe tragen zur neuronalen Erregbarkeit und synaptischen Signalübertragung bei und beeinflussen zudem die Calciumhomöostase in glatter Muskulatur und im Herzen über Crosstalk mit Calcineurin/NFAT- und MAPK-Signalwegen. Eine dysregulierte TRPC3/6/7-Achse wird mit abweichender Ca2+-Signalgebung in kardiovaskulären und neurodegenerativen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht und wird häufig in Modellen für Hypertrophie, Fibrose und exzitotoxischen Stress untersucht.

Das TRPC3/6/7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRPC3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRPC3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRPC3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRPC3/6/7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRPC3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRPC3/6/7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRPC3-Exone abzielen, die für die TRPC3/6/7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRPC3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRPC3/6/7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TRPC3/6/7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRPC3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRPC3/6/7 HDR-Plasmid (h) und TRPC3/6/7 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRPC3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRPC3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.