Plasmide Double Nickase (h) TRP2/DCT: sc-400334-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TRP2/DCT correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TRP2/DCT Double Nickase (h) et le plasmide TRP2/DCT Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DCT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TRP2/DCT Antibody (C-9): sc-74439
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TRP2/DCT | sc-400334-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TRP2/DCT | sc-400334-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La DCT humaine (dopachrome tautomérase), également appelée TRP2, est une enzyme mélanosomale de la voie biosynthétique de l’eumélanine qui catalyse la conversion du dopachrome en DHICA, influençant la composition des pigments et l’équilibre rédox dans les mélanocytes. Son expression est régulée par des programmes de lignée mélanocytaire, tels que la transcription dépendante de MITF, et s’intègre aux processus de biogenèse et de trafic des mélanosomes. L’activité de la DCT module les réponses cellulaires au stress oxydatif et les états de différenciation, ce qui la rend pertinente pour les études de la biologie de la pigmentation et de la fonction des mélanocytes. Une expression dérégulée de la DCT est fréquemment examinée dans le mélanome et d’autres troubles liés aux cellules pigmentaires, comme marqueur de l’identité de lignée et de la biologie tumorale.
TRP2/DCT Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DCT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DCT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DCT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DCT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.