Troponin T-SS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423460
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Troponin T-SS Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Troponin T-SS-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Troponin T-SS: sc-365014
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Troponin T-SS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-423460 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Tnnt1 kodiert das Troponin T der langsamen Skelettmuskulatur (Troponin T-SS), einen zentralen Bestandteil des Troponin-Komplexes der dünnen Filamente, der die Ca²⁺-Bindung durch Troponin C mit der Bewegung von Tropomyosin und dem Aktin–Myosin-Querbrückenzyklus koppelt. Durch die Regulation der Kontraktionskinetik des Sarkomers und der Ca²⁺-Empfindlichkeit trägt Troponin T-SS wesentlich zur Funktion langsam zuckender Muskelfasern bei und unterstützt die Muskelentwicklung sowie adaptive Umbauprozesse. Eine veränderte TNNT1-Expression oder -Sequenz ist mit erblichen Myopathien und Störungen der Kontraktilität assoziiert, was TNNT1 für Studien zur Integrität des Sarkomers, zur Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung und zur Festlegung des Fasertyps relevant macht. In Mausmodellen erlaubt eine Störung von Tnnt1 die mechanistische Untersuchung von Muskelschwäche-Phänotypen sowie nachgeschalteter transkriptioneller und proteostatischer Antworten.
Das Troponin T-SS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnnt1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnnt1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnnt1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Troponin T-SS-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnnt1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Troponin T-SS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Tnnt1-Exone abzielen, die für die Troponin T-SS-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnnt1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Troponin T-SS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Troponin T-SS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnnt1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Troponin T-SS HDR-Plasmid (m) und Troponin T-SS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnnt1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnnt1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.