Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401530

Übersicht

TNNI2 kodiert das schnelle Skelettmuskel-Troponin I (Troponin I-FS), die inhibitorische Untereinheit des Troponin-Komplexes, der die Aktin-Myosin-Interaktionen in Ca²⁺-abhängiger Weise reguliert. Durch Bindung an Tropomyosin und Aktin hilft Troponin I-FS dabei, das dünne Filament nachgeschaltet an die sarkomerische Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung zwischen entspanntem und kontraktilem Zustand umzuschalten. Die TNNI2-Aktivität ist in die Calcium-Signalgebung, die Myofibrillogenese und muskelfasertyp-spezifische Kontraktionsprogramme eingebettet, die Kraftentwicklung und Ermüdungsresistenz prägen. Genetische Störungen, die die Troponin-Regulation und die Sarkomerfunktion beeinträchtigen, sind mit erblichen Phänotypen wie Skelettmuskelkontrakturen und Myopathien assoziiert, was TNNI2 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Untersuchungen der Muskelphysiologie und krankheitsassoziierter Kontraktionsdefekte macht.

Das Troponin I-FS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TNNI2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TNNI2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TNNI2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Troponin I-FS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TNNI2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Troponin I-FS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TNNI2-Exone abzielen, die für die Troponin I-FS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TNNI2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Troponin I-FS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Troponin I-FS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TNNI2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Troponin I-FS HDR-Plasmid (h) und Troponin I-FS HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TNNI2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TNNI2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.